使用以下代码……

Imports System.IO

在主窗体加载事件上执行以下操作：

If File.Exist(Application.StartupPath & "\abc.txt") Then
    'You can change the extension of the file to what ever you desire ex: dll,xyz etc.
    MsgBox("Only one Instance of the application is allowed!!!")
    Environment.Exit(0)
Else
    File.Create(Application.StartupPath & "\abc.txt",10,Fileoptions.DeleteonClose)
Endif

这将处理单个实例以及瘦客户端,并且在应用程序运行时无法删除该文件.关闭应用程序或者如果应用程序崩溃,文件将自行删除.